人ruxian癌阿黴素耐藥細胞（MCF-7/Adr

人ruxian癌阿黴素耐藥細胞(MCF-7/Adr)
細胞培養步驟：
1)培養基及培養凍存條件準備：
注意：培養瓶裏面的培養液是不含藥物的，待細胞長到70-80%彙合度時，去掉培養液，加含500ng/ml阿黴素藥物的培養液，放入培養箱，這段時間會有少部分細胞懸浮起來，屬於(yú)正常情況，通過換液可以去掉，等細胞長滿就可以消化 傳代瞭(le)，這時可以一直用含藥物培養基來培養細胞，兩代之後(hòu)就可以将藥物濃 度提髙到l〇〇〇ng/ml，細胞凍(dòng)存時不要在培養基中加藥物。

1.準備(bèi) RPIVM-1640 培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO);北美胎牛血清 (United States, GIBCO)，

10%;雙抗 1%，添加 2mML-GUJ，添加 luM Adr。
2.培養條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養箱 濕度爲70%-80%。
3.凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
 
2)細胞處理：
1.複蘇細胞：将含有lmL細胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，補(bǔ)加l-2mL培養基後吹勻。然後将所有細胞懸液加入培養瓶中培養過(guò)夜（或将 細胞懸液加入l〇cm皿中，加入約8ml培養基，培養過(guò)夜）。第二天換液並(bìng)檢 查細胞密度
。

2.細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)於(yú)培養瓶中，置於(yú)37°C培養箱中消化1-2分鍾，然後在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部 分變(biàn)圓並(bìng)脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養瓶後加少量培養基終止消化。按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻後吸出，在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液
，補(bǔ)加l-2mL培養液後(hòu)吹勻。将細胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

 
3.細胞凍存：待細胞生長狀态良好時，可進行細胞凍存。
 
下面T25瓶爲例；
細胞凍存時，棄去培養基後，PBS清洗瓶底1-2次後加入lml胰酶，細胞變圓脫落後，加入2ml*培養基終止消化，可使用血球計(jì)數闆計(jì)數。1000RPM離心5分鍾去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至終濃度爲 10%。加入DMSO後(hòu)迅速混勻，按每lml的數量分配到凍(dòng)存管中，注意凍(dòng)存管做好标識
。本公司按每個凍(dòng)存管細胞數目大於(yú)1X106個細胞凍(dòng)存。将凍(dòng)存管置於(yú)程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以後轉入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍(dòng)存管位置以便下次拿取。

 
人ruxian癌阿黴素耐藥細胞(MCF-7/Adr)注意事項：
收到細胞後，若發現幹冰己揮發幹淨、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們電聯。
所有動物細胞均視爲有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全台内操作，並請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌後方能丢棄。

 
細胞特性：
1)來源
：ruxian癌
2)形态：上皮細胞樣貼壁生長
3)含量
：>lxl06 個/mL
4)污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測爲陰性
5)規格：T25瓶或者lmL凍存管包裝
 
人ruxian癌阿黴素耐藥細胞(MCF-7/Adr)運輸和保存：可選擇幹冰運輸及發送複蘇存活細胞方式：（1)幹冰運輸，收到後立即轉入液氮凍存或直接複蘇；（2)存活細胞

，收到後應繼續生長，傳代達到細胞生長狀态良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。
細胞用途：僅供使用。